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酵母蛋白裂解液是一种高效方便的酵母裂解液。能裂解各种酵母细胞并充分释放胞浆蛋白和可溶性膜蛋白、核蛋白。裂解蛋白产物最大限度地保留了蛋白的特性和功能。

提取过程简单方便，避免了重复性差的研磨法，超声波法或压榨法对酵母细胞的破坏，避免激烈的机械处理造成的氧化和热度升高对目的蛋白的破坏作用。

• 使用方便，提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
  
• 提取过程简单方便，将蛋白提取的时间缩短至30分钟～1小时。
  
• 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
  
• 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
  
• 总蛋白提取液含多种有效成分，可充分释放胞浆蛋白、核蛋白和膜蛋白，又可结合释出的蛋白防止沉淀。
  
• 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

• 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
  
• 实验过程中的所有试剂须预冷，所有器具须放-20℃冰箱预冷，整个过程须保持样品处于低温。
  
• 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
  
• 可以根据自己实验需要加入其他蛋白酶抑制剂单品。
  
• 本试剂盒中提取液和蛋白酶抑制剂均不含EDTA，根据需要可自行加入。

• 提取液制备：
  每500μL酵母蛋白提取液B中加入2μL蛋白酶抑制剂混合物，混匀置冰上备用。
  
  • 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
    
  • 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。
• 取酵母培养物，在4℃，1000×g条件下离心5～10分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集酵母沉淀。
  
• 用冷PBS洗涤酵母两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
  
  • 在1000×g离心5分钟。
• 用PBS重悬酵母，加入终浓度0.2%的β巯基乙醇，充分混匀，室温静置20分钟。
  
• 在1000×g离心5分钟，弃上清，留沉淀。
  
• 每100μL～200μL体积酵母沉淀物中加入500μL冷的酵母蛋白提取液A，充分混匀。
  
  • 根据酵母细胞量调整提取液用量，一般加菌体体积的2～5倍均可。
    
  • 按酵母菌体体积每100μL或100mg湿重菌体加入250～500μL提取液。
    
  • 若后面步骤中试剂B处理时沉淀难以裂解，应延长此步试剂A的处理时间。
• 在室温或37℃条件下于振荡30分钟～2小时。
  
  • 使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。
    
  • 没有振荡条件也可以不振荡，稍微延长提取液的处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀。
    
  • 不同酵母样本需要的时间差异较大，根据下游细胞裂解的难易程度调整，如果下游试剂B较难裂解，裂解后蛋白浓度太低，需要延长此步骤处理时间。可以延长至2小时。
• 在4℃,2000×g条件下离心5～10分钟，弃上清，留沉淀。
  
• 在沉淀物中加入300～500μL冷的酵母蛋白提取液B，混匀后，在2～8℃条件下振荡30～45分钟。
  
  • 试剂B处理后沉淀应明显减少，否则延长处理时间。
    
  • 使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。
    
  • 没有振荡条件的话，在4℃静置，，稍微延长处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀。
• 在4℃,14000×g条件下离心15分钟。
  
• 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到酵母总蛋白。
  
• 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
  
  • 建议用BCA法进行蛋白定量。
    
  • 蛋白样品-80℃存放一年没问题。主要不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。